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Verfügbarkeitsstatus: | |
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Produktbeschreibung
Produkteinführung:
Diese fertige PCR-Vormischung enthält modifizierte PFU-DNA-Polymerase, DNTPs und optimiertes PCR-Reaktionspuffer bei 2X-Konzentration. Es eignet sich für herkömmliche PCR, Kolonie PCR, komplexe Vorlage und hohe GC-Vorlage PCR. Zur PCR-Amplifikation wurden nur Vorlage, Primer und DDH2O zugegeben, um die Konzentration der Mischungslösung 1x zur Durchführung der PCR-Reaktion zu erstellen. Es hat eine starke Amplifikationsfähigkeit, schnelle Amplifikationsgeschwindigkeit und Verlängerungsgeschwindigkeit von bis zu 5-15s / kb. Es hat eine hohe Treue und hohe Spezifität. Das Amplifikationsprodukt ist ein flaches Terminal. Dem Produkten wurde der Ladefarbstoff hinzugefügt, und die verstärkten Produkte können direkt zur Erkennung von Agarosegelelektrophorese verwendet werden.
Packungsinhalt:
Katze. Nein. | Produktbeschreibung | Volumen |
G3305. | 2x FAST PFUS PCR Master Mix | 1 ml / 5ml. |
Speicherbedingung:
Nasser Eisbeuteltransport; Bei -20 ℃ Temperatur gelagert, gültig für 12 Monate.
Verwendungszweck:
1. Empfohlenes PCR-Reaktionssystem:
Komponente | 20UL RXN. | 50ul rxn. | Endkonzentration |
Schablonea | Variable | Variable | nach Bedarf |
Vorwärtsprimer (10UM)b | 24. | 0.4um | |
Reverse Primer (10UM)b | 0.8UL. | 24. | 0.4um |
2x FAST PFUS PCR Master Mix | 10. | 25UL. | 1x. |
(DMSO, optional)c | (0,6 ul) | (1.5 ul) | (3%) |
DDH2O. | Auf 20ULL | In den letzten 50UL. |
A: Bei Verwendung von Plasmid- oder Phagen-DNA als Vorlage ist die empfohlene Dosierung 10 ng-1 pg pro 50UL-System; Bei der Verwendung von genomischer DNA als Vorlage beträgt der empfohlene Additionsbetrag 250-50 ng pro 50UL-System. Wenn cDNA die Vorlage ist, wird empfohlen, es um 2-100-mal zu verdünnen und nicht mehr als 10% des gesamten Systems hinzuzufügen. Zu viele Vorlagen führen leicht zu einer nichtspezifischen Amplifikation, und zu wenige Vorlagen führen leicht zu einer niedrigen PCR-Amplifikationseffizienz.
A: Der endgültige Primerkonzentrationsbereich beträgt 0,2-1,0 ummer, und die empfohlene Primerkonzentration beträgt 0,4 um. Zu wenige Primer können zu einer geringen Verstärkungsausbeute oder keine Verstärkung führen, und zu viele Primer können zu einer nichtspezifischen Amplifikation führen.
C: Hohe GC-Vorlage kann dem Reaktionssystem nicht mehr als 10% zusätzliche DMSO hinzufügen.
2. Empfohlene PCR-Amplifikation Bedingungen:
Schritt | Temperatur | Time | Fahrräder |
Anfängliche Denaturierunga | 98 ℃. | 30s-120s. | 1 |
Denaturierung | 98 ℃. | 5-10s. | 25-35. |
Glühenb | 50-72 ℃. | 10-30s. | |
Verlängerungc | 72 ℃. | 5-15s / KB. | |
Endgültige Erweiterung | 72 ℃. | 5-10min. | 1 |
Halten | 4-16 ℃ | Für immer |
A: Die Vorderzeitzeit 30s ist für die meisten herkömmlichen Vorlagen geeignet, komplexe Vorlage kann die Denaturierungszeit auf 2 Minuten verlängern.
B: Für komplexe Vorlagen kann die Glühzeit mit der Amplifikation der angehaltenen Grundierungen auf 30er Jahre verlängert werden.
C: Die Verlängerungsgeschwindigkeit des Plasmids und anderer einfache Vorlagen wird empfohlen, 5-10s / kb zu betragen; Routine Genomvorlage Empfohlene Verlängerungsrate von 10-15s / KB; Komplexe Vorlagen 15-30s / Kb.
Anmerkungen:
1. Bitte abtauen Sie sich bitte gründlich ab, und mischen Sie es gut. Nach dem vollständigen Schmelzen kann es mindestens 2 Wochen lang stabil bei 4 ℃ gelagert werden, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden.
2. Bitte tragen Sie Labor-Kleidung und Einweghandschuhe.