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Anteil an:

Annexin V-IF488 / PI-Zell-Apoptose-Erkennungskit

Volumen: 50t.
Verfügbarkeitsstatus:
  • G1513-50T.
  • Servicebio
  • ServiceBio.

Produktbeschreibung

Produktinformation:

Produktname

Katze. Nein.

Volumen

Annexin V-IF488PI-Zell-Apoptose-Erkennungskit

G1513-50T.

50t.

G1513-100T.

100t Jahre

Produktbeschreibung:

Apoptose ist ein normaler physiologischer Prozess, der im Prozess der embryonalen Entwicklung und der Wartung von Tissue Homostase auftritt. Es wird von vielen morphologischen Veränderungen begleitet. Unter ihnen ist der Verlust der Zellmembran eine der frühen Eigenschaften der Apoptose. In normalen Zellen ist Phosphotidylserin (PS) nur auf der Innenseite der Phospholipid-Bilayer der Zellmembran verteilt, aber im frühen Stadium der Apoptose dreht sich PS von der Innenseite der Lipidmembran an die Außenseite, wodurch es freigesetzt wird an der Außenseite der Zelle. Annexin V (Anhang V) ist ein CA2 + -Drendendes Phospholipid-Bindungsprotein mit hoher Affinität für PS und bindet insbesondere an Zellen, die PS ausgesetzt sind. Daher wird Anhangin V als eine der Indikatoren zum Erkennen der frühen Zellapoptose verwendet. Propidiumjodid (PI) ist ein Nukleinsäurerfarbstoff. Es kann keine normalen Zellen mit intakten Zellmembranen und frühen apoptotischen Zellen eindringen, sondern können die Zellmembranen spät apoptotischer und nekrotischer Zellen eindringen und den Kern färben.

Dieses Produkt verwendet das mit IF488-Fluoreszenzfarbstoff-Molekül, das Anhangin V als Erkennungssonde markiert ist, um eine frühe Zell-Apoptose zu erkennen. Gleichzeitig wird PI verwendet, um überlebende Zellen von nekrotischen und späten apoptotischen Zellen zu unterscheiden. Wenn Annexin V-IF488 in Kombination mit PI verwendet wird, zeigen lebende Zellen negative Färbung (Anhang V- / PI-), frühe apoptotische Zellen zeigen einzelne Fluoreszenz-positive (Annexin V + / PI-), und späte apoptotische Zellen und nekrotische Zellen zeigen zwei Fluoreszenz positiv (Annexin V + / PI +). Dieses Kit eignet sich für die Durchflusszytometrie- oder Fluoreszenzmikroskoperkennung.

Lagerung und Transport

Transport in nassem Eis; Aufbewahren bei 2-8 ° C im Dunkeln, gültig für 12 Monate.

Komponente:

Komponentennummer

Komponente

G1513-50T.

G1513-100T.

G1513-1.

Annexin V-IF488

250 μl.

2 × 250 μl

G1513-2.

Propidium Jodid (PI)

250 μl.

2 × 250 μl

G1513-3.

1 × Bindungspuffer

25 ml.

2 × 25 ml

Produktbenutzerhandbuch

1 stück

Betriebsschritte:

1. Suspensionszellen: Nehmen Sie die Zellsuspension und sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation bei 500 g für 5 min bei 4 ° C;

Anhaftende Zellen: Sammeln Sie zunächst den Zellkulturüberstand. Nach der Verdauung mit EDTA-Free Trypsin (G4002 empfohlen) kombinieren Sie mit dem Zellkulturüberstand und sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation bei 500 g für 5 min bei 4 ° C. Die Trypsin-Verdauungszeit sollte nicht zu lang sein, um übermäßige Verdauung zu vermeiden und falsche Positive zu verursachen.

2. Waschen Sie die Zellen zweimal mit vorgekühlten PBS (G4202 empfohlen) und sammeln Sie die Zellen mit jeder Zentrifugation bei 500 g jeweils 5 Minuten bei 4 ° C;

3. sanft resuspendieren Sie die Zellen im vorgekühlten 1 × Bindungspuffer und stellen Sie die Zellkonzentration auf 1 bis 5 × 106 / ml ein.

4. Nehmen Sie 100 μl Zellsuspension, fügen Sie 5 μl Annexin V-IF488 und 5 μl Pi hinzu, mischen Sie sanft und schützen Sie sich von Licht bei Raumtemperatur 8-10 min;

5. Fügen Sie 400 μl vorkühlgekühlter 1 ×-Bindungspuffer, schütteln, sanft schütteln und die Erfassung mit einem Durchflusszytometer oder einem Fluoreszenzmikroskop innerhalb von 1 h durchführen.

Ergebnisanalyse

1. Durchflusszytometrie.

A. Wählen Sie die entsprechende Spannung aus und stellen Sie die Lichtkompensation während der Durchflusszytometrieerfassung und -analyse ein. Es wird empfohlen, eine negative Steuerung (ohne Marker) einzustellen, um die Spannung mit Ausnahme der experimentellen Gruppe und einer Einkennzeichnungssteuerung (nur Anhang V-IF488 und nur PI) zur Einstellung und Kompensation einzustellen;

B. Referenzbeispiele für die Erfassung und Analyse der Durchflusszytometrie:

Jurkat T-Lymphomzellen wurden mit 5 μm Camptothecin für 6 Stunden induziert. Siehe das obige experimentelle Verfahren und verwenden Sie die Fließzytometrie, um die Ergebnisse zu erkennen. Die Ergebnisse sind in der folgenden Abbildung dargestellt.

Die maximale Anregungswellenlänge von IF488 beträgt 491 nm und die maximale Emissionswellenlänge beträgt 518 nm; Die maximale Anregungswellenlänge des PI-DNA-Komplexes beträgt 535 nm und die maximale Emissionswellenlänge beträgt 615 nm. Zeichnen Sie ein Zweidispersionspunktgraph mit der relevanten Analysesoftware des Durchflusszytometers mit IF488 auf der Abszisse und PI auf der Ordinate. In einem typischen Experiment haben lebende Zellen keine Fluoreszenz, und die gestreuten Punkte befinden sich im ersten Quadranten der unteren linken Seite. Die apoptotischen Zellen in der frühen Bühne haben eine starke grüne Fluoreszenz, und die zerstreuten Punkte befinden sich im zweiten Quadranten des rechtens. Späte apoptotische Zellen und nekrotische Zellen zeigen eine rote und grüne Doppelfluoreszenz, und die zerstreuten Punkte befinden sich im dritten Quadranten des oberen Rechts.

2. Fluoreszenzmikroskopinspektion

Hinzufügen von 6 μl Annexin V-IF488 und PI doppelt gefärbter Zellsuspension auf dem Glasschieber, decken Sie es mit einem Deckglas ab und beobachten Sie unter einem Fluoreszenzmikroskop mit einem Zweifarbfilter. Annexin V-IF488 hat ein grünes Fluoreszenzsignal und PI ist rotes Fluoreszenzsignal.

Anmerkungen:

1. Während des gesamten Experiments sollte der Betrieb so sanft wie möglich sein, um den Zellenbruch zu vermeiden und die experimentellen Ergebnisse zu beeinflussen.

2. Das Waschen der Zellen mit PBS kann nicht weggelassen werden, und nehmen Sie gleichzeitig die restlichen PBS so weit wie möglich aus.

3. Wenn Pankreatin während des Betriebs verwendet wird, enden Sie unbedingt den Verdau mit Serum und entfernen Sie das restliche Pankreatin so weit wie möglich.

Nachdem die anhaftende Zellproptose stimuliert wird, schweben einige Zellen, und die Zellen im Zellkulturüberstand werden gleichzeitig gesammelt, wodurch das Ergebnis genauer wird.

5. Apoptose ist ein kontinuierlicher und dynamischer Prozess, und die fluoreszierende Substanz wird gequencht, so dass die Erfassung so bald wie möglich nach der Reaktion durchgeführt werden sollte, und der gesamte Prozess sollte auch so weit wie möglich vor Licht geschützt werden.

6. Die Erkennung der frühen Zellproptose wird empfohlen, vorläufige Experimente durchzuführen, um die entsprechenden Schritte zu optimieren.

7. Bitte tragen Sie während des Experiments Laborkleidung und Einweghandschuhe, um eine Kontamination zu vermeiden und sicherzustellen.

Dieses Produkt ist nur für wissenschaftliche Forschungszwecke, nicht für die klinische Diagnose!

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