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Anteil an:

BCA-Protein-quantitativer Erkennungskit

Verfügbarkeitsstatus:
  • G2026-1000T.

Produktbeschreibung

Produkteinführung:

Es gibt zwei am häufigsten verwendete Methoden zur quantitativen Erkennung von Proteinkonzentration: Bradford und BCA. Das Grundprinzip der quantitativen Erkennung von Proteinen durch BCA-Verfahren basiert auf der BIURET-Reaktion, dh der CU2 + wird unter alkalischen Bedingungen Cu + reduziert und dann mit BCA (Bicinchonsäure, einem chromogenen Mittel) chelatiert. Jedes Molekül chelatiert eine Cu, um einen lila wasserlöslichen Komplex zu bilden. Die Substanz hat den höchsten Absorptionswert bei 562 nm und die Farbtiefe ist proportional zur Proteinkonzentration, so dass er zur quantitativen Erfassung von Protein verwendet werden kann, die Proteinkonzentration hat eine gute lineare Beziehung in der Konzentration von 50 bis 2000 μg / ml.

Diese Methode ist nicht von den chemischen Substanzen in den meisten Proben betroffen, kompatibel, kompatibel mit hohen Konzentrationen an Skalenentferner, SDS, mit Konzentrationen von bis zu 5%, enthalten 5% Triton X-100, 5% von Tween-20,60,80 usw. . Aber chelatierende Wirkstoffe und hohe Konzentrationen an Reduktionsmitteln beeinflussen die Ergebnisse, sorgen für Nein EGTA, in den Proben EDTA-Konzentration unter 10 mm, dtt weniger als 1 mm, β-Mercaptoethanol liegt unter 1 mm. Wenn die Probe ein Chelatbildner oder Reduktionsmittel enthält, betrachten Sie unsere anderen Produkte G2001 Bradford Protein quantitativer Erkennungskit.

Packungsinhalt:

Katze. Nein.

Produktbeschreibung

Volumen

G2026.

BCA-Protein-quantitativer Erkennungskit

1000t.

Komponenten:

Komponentennummer

Komponente

G2026-1000T.

G2026-1.

BCA-Reagenz

2 × 100 ml

G2026-2.

Kupfersulfatlösung.

5 × 1,2 ml

G2026-3.

BSA

5 × 25 mg

G2026-4.

BSA-Lösung

5 × 1,5 ml

Speicherbedingung:

Das gesamte Reagenz-Kit kann bei Raumtemperatur transportiert werden; Der Proteinstandard (BSA) wird bei 4 ℃ gespeichert, 12 Monate gültig. Nach der Protein-Standardlösung, auf -20 ℃ gespeichert und innerhalb von 6 Monaten verwendet. Die verbleibenden Reagenzien werden bei Raumtemperatur gespeichert und 12 Monate gültig.

Verwendungszweck:

1. Protein-Standardreserve-Lösung: 1 ml-Protein-Standard-Vorbereitungslösung wurde zum BSA-Protein-Standardrohr gegeben, und 25 mg Proteinstandard wurde vollständig gelöst, dh die Protein-Standardreserve-Lösung mit einer Konzentration von 25 mg / ml wurde erhalten. Die Protein-Standardlösung kann seit langem für -20 ° C erhalten werden.

2. Herstellung von Protein-Standard-Arbeitslösung: Nehmen Sie die geeignete Menge von 25 mg / ml Protein-Standardreserve-Lösung ein, verdünnen Sie 50 Times mit PBS oder normaler Salzlösung, erhalten Sie die Protein-Standard-Arbeitslösung mit Endkonzentration von 0,5 mg / ml. Achten Sie auf Verdünnung gemäß der 10-fachen Gradientenmethode, um eine genaue Verdünnung zu gewährleisten.

3. Standardkurve (Enzym-Kennzeichnungsmethode): Die Protein-Standard-Arbeitslösung wurde gemäß 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 uld in der 96-Well-Platte gegeben und dann 20, 19, 18, 16 hinzugefügt , 12, 8, 4, 0UL mit PBS oder normaler Salzlösung, und dann wurde die Gradientenarbeitslösung auf 20 ul aufgefüllt. Es wurde dann eine Gradientenkurve der Proteinkonzentration von 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500ug / ml erhalten.

4. Herstellung von zu testenden Proben: Die zu testenden Proteinproben sind ordnungsgemäß verdünnt (die Proteinkonzentration der Probe kann in der Standardkurve erfasst werden, um sicherzustellen, dass die Testergebnisse glaubwürdig sind) und der 96-Well-Platte gemäß die Menge von 20 μl pro Probe. Die zu testende Probe und der Proteinstandard wurden mit der gleichen Lösung verdünnt.

5. Herstellung der BCA-chromogenen Arbeitslösung: Das BCA-Reagenz und die Kupfersulfatlösung wurden gleichmäßig nach einem Volumenverhältnis von 50: 1 gemischt, um die BCA-chromogene Arbeitslösung zu erhalten. BCA-chromogenes Arbeitsfluid kann 24 Stunden bei Raumtemperatur gelagert werden. Jede zu testende Probe benötigt 200 μl, die vorgeschlagen wird, auf Anfrage vorbereitet zu sein, um Abfälle zu vermeiden.

6. Prüfung: Fügen Sie 200 μl, der BCA-chromogenen Arbeitsflüssigkeit auf Standard-Kurve-Probenloch und das Probenloch, das auf getestet werden soll Als Referenz, Colorimetrie bei 562 nm Wellenlänge, notieren Sie die Absorption jedes Lochs. (Hinweis: Die Reaktion kann auch bei Raumtemperatur 2 h oder 60 ℃ Reaktion 30 min sein. Wenn die Proteinkonzentration niedrig ist, wird es auf 60 ℃ Reaktion empfohlen)

7. Berechnung: Die Standardkurve wird mit Gradientenproteingehalt (μg / ml) als horizontaler Koordinaten- und Absorptionswirkung als vertikale Koordinate gezeichnet. Gemäß der Absorptionswirkung der Probe kann die Proteinkonzentration (μg / ml) der in dem entsprechenden Loch zu testenden Probe auf der Standardkurve gefunden und dann mit dem Verdünnungsmöglichkeiten der Probe multipliziert werden, ist die eigentliche Proteinkonzentration von die zu testende Probe.

Anmerkungen:

1. Die BCA-Protein-quantitative Erkennung ist stark von Temperatur und Zeit beeinflusst, ändert sich der Absorptionswert mit der Zeitverlängerung oder der Temperaturanstieg. Wenn die Zeit und die Temperatur der Farbreaktion nicht genau gesteuert werden können, wird vorgeschlagen, dass für jede Bestimmung eine Standardkurve vorgenommen werden sollte.

2. Bei der Bereitstellung der Protein-Standardreserve-Lösung ist es erforderlich, eine ausreichende Auflösung sicherzustellen. Beim Verdünnen der Standardarbeitslösung des Proteins wird empfohlen, den 10-fach-Gradienten zu verdünnen, um nicht 50-mal zu verdünnen, um einen großen Fehler zu vermeiden.

3. Um die genaue Quantifizierung von Protein sicherzustellen, ist es besser, dieselbe Pufferlösung für die Probenextraktion und Verdünnung des Proteinstandards zu wählen, der mit den Erkennungsbedingungen übereinstimmt. Wenn der Puffer selbst einen hohen Hintergrundwert hat, wird empfohlen, andere Methoden zu verwenden.

4. Bitte tragen Sie während des Betriebs Lab-Kleidung und Einweghandschuhe.

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