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Anteil an:

Fitc-Tyramid für Tyramidsignalverstärkung Immunfluoreszenzreagenz

Volumen: 50UL.
Verfügbarkeitsstatus:
  • G1222-50UL.
  • Servicebio

Produktbeschreibung

FITC-TYRAMIDE.

Katze-Nr. G1222-50UL.

Produkteinführung:

Dieses Produkt FITC-Tyramid, FITC-markiertes Tyramid, wird zur Tyramidsignal-Amplifikationstechnologie (TSA, Tyramidsignalverstärkung) verwendet, nachstehend als TSA-Technologie bezeichnet. Das Hauptprinzip der TSA-Technologie ist die Verwendung der Peroxidase-Reaktion von Tyramid (d. H. Das fluoreszentmarkierte Tyramidsalz bildet eine kovalente Bindungsbindungsstelle unter HRP, die von H2O2 katalysiert ist), um eine große Anzahl von enzymatischen Reaktionen zu erzeugen. Dieses Produkt kann mit den umgebenden Proteinrückständen (einschließlich Tryptophan, Histidin und Tyrosinrückstände) interagieren, um eine große Menge an Fluorescein-Abscheidung an der Antigen-Antikörper-Bindungsstelle zu bilden, um die Signalverstärkung zu erreichen. Sie können auch verschiedene fluoreszierende Tyramine verwenden, um mehrere fluoreszierende Färbung durch Wiederholen des Immunolabels mehrmals zu erreichen.

Die Fluoreszenzspektrum-Daten der Serie-Produkte sind wie folgt:

Art.-Nr.

Produktname

Spezifikation

Ex / em.

G1222-50μL.

FITC-TYRAMIDE.

50 μl.

492/518.

G1223-50μL.

CY3-TYRAMIDE.

50 μl.

555/569.

G1231-50 μl.

IF488-TYRAMIDE.

50 μl.

491/516.

G1233-50 μl.

IF555-TYRAMIDE.

50 μl.

557/570.

G1232-50 μl.

if647-Tyramide.

50 μl.

656/670.

Packungsinhalt:

Produkt Artikel-Nr.

Produktname

Spezifikation

FITC-TYRAMIDE.

G1222-50μL.

50 μl

Lagerbedingungen:

EIR Packs Transport, Speichern bei -20 ° C, gültiger Zeitraum beträgt 6 Monate.

Anweisungen

Gewebescheiben Als Beispiel, das Wasser in den folgenden experimentellen Schritten ist reines Wasser, und die beteiligten Reagenzien beziehen sich auf servicebio-related-Produkte:

1. Deparaffinisieren Sie Gewebeabschnitte zum Wasser;

2. Antigenabruft: Gemäß dem verwendeten primären Antikörper und der Art der Probe verwenden Sie ein geeignetes Verfahren, um das Antigenabruf auf dem Gewebeabschnitt durchzuführen. 1 × PBS (G4202 oder G0002 wird empfohlen) 3 mal, 5 min jedes Mal waschen;

3. Verwenden Sie einen Pap-Stift, um das Gewebe zu kreisen und zu markieren.

4. (optional) Fügen Sie dem Gewebe (empfohlene G1221A-Lösung) mit dem Gewebe (empfohlene G1221A-Lösung) an das Gewebe hinzu, inkubieren Sie 30 Minuten bei Raumtemperatur und waschen Sie 5 min;

5. Inaktivieren von endogenem Peroxidase: 3% H2O2 in den Abschnitt hinzufügen, um das Gewebe abzudecken, und inkubieren Sie 25 Minuten lang bei Raumtemperatur in der Dunkelheit, um endogene Peroxidase zu blockieren, um eine nichtspezifische Hintergrundfärbung zu reduzieren. 3 mal mit 1 × PBS, 5 min jedes Mal waschen;

6. Block: Nachdem die Objektträger leicht getrocknet sind, werden 30 Minuten lang 3% BSA oder Serum zugetropft, um 30 Minuten abzudichten. Wenn der primäre Antikörper von Ziegen-Ursprungs ist, blockieren Sie mit einem Eselserie von 10%, und blockieren Sie mit 3% BSA für andere Quellen.

7. Inkubieren Sie den primären Antikörper: Verdünnen Sie den primären Antikörper auf eine geeignete Konzentration mit 1 × PBS oder Blockierlösung (G2010 wird empfohlen). Schütteln Sie die Blockierlösung sanft auf dem Abschnitt ab, fügen Sie den verdünnten Primärantikörper tropfenweise zu, um das Gewebe abzudecken, und legen Sie den Abschnitt flach in eine feuchte Kammerbox mit Wasser und inkubieren Sie über Nacht bei 4 ° C. 3 mal mit 1 × PBS, 5 min jedes Mal waschen;

8. Inkubieren Sie den hrp-markierten sekundären Antikörper: Verdünnen Sie den sekundären Antikörper auf eine geeignete Konzentration mit 1 × PBS- oder Blockierlösung (G2010 wird empfohlen), fügen Sie den sekundären Antikörper tropfenweise dem Gewebe hinzu, und inkubieren Sie 50 Minuten bei Raumtemperatur. 3 mal mit 1 × PBS, 5 min jedes Mal waschen;

9. Verdünnen Sie FITC-TYRAMIDE 1: 500 mit TBST (füge H2O2 zur endgültigen Konzentration von 0,03 ‰, w / v vor der Verwendung), um die Arbeitslösung der TSA-Färbung vorzubereiten. Fügen Sie zu jeder Probe 100 μl Färbungsaufarbeitungslösung hinzu, und inkubieren Sie 10 Minuten bei Raumtemperatur in der Dunkelheit. Waschen Sie mit 1 × PBS 3-mal, 5 min jedes Mal; (Hinweis: Die TSA-Färbe-Arbeitslösung wird empfohlen, um auf den aktuellen Gebrauch vorbereitet zu sein, und es muss bei 4 ° C gelagert und vor Licht geschützt werden. Es ist innerhalb von 24 Stunden wirksam)

10. Mikrowellenbehandlung: Der Gewebeabschnitt befindet sich in einem mit Antigen-Abruflösung gefüllten Reparaturkasten (wählen Sie die entsprechende Antigen-Retrieval-Lösung gemäß dem Gewebtyp und Antikörper) zur Mikrowellenheizungsbehandlung zur Entfernung der gebundenen primären und sekundären Antikörper. In diesem Schritt ist es notwendig, trockene Flocken zu verhindern, die durch übermäßige Flüssigkeitsverdampfung verursacht werden.

(HINWEIS: Wenn Sie doppelte oder mehrfache fluoreszierende Färbung durchführen müssen, fahren Sie entsprechend diesem Schritt fort. Wenn Sie keine doppelte oder mehrfache fluoreszierende Färbung durchführen müssen, überspringen Sie diesen Schritt und fahren Sie mit Schritt 12 fort.)

11. Wiederholen Sie die Schritte 7-10, inkubieren Sie den zweiten Primärantikörper, den sekundären Antikörper und das TSA-Label und die Mikrowellenbehandlung, um den primären Antikörper und den sekundären Antikörper zu entfernen.

12. NUKLUS ZUM BEREITUNG MIT DAPI: Nachdem die Abschnitte leicht getrocknet sind, fügen Sie dem Gewebe die Dapi-Färbungslösung (G1012 empfohlen) hinzu und inkubieren Sie 10 Minuten bei Raumtemperatur in der Dunkelheit. Waschen Sie dreimal mit 1 × PBS, 5 Minuten jedes Mal.

13. (optional) Tissue-Autofluoreszenzlöschung: Autofluoreszenz-Quencher (G1221B-Lösung empfohlen) zum Gewebe hinzufügen, 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren und 3 Minuten mit fließendem Wasser spülen.

14. Montage- und mikroskopische Untersuchung: Nachdem die Abschnitte leicht getrocknet sind, fügen Sie Anti-Fluoreszenz-Abschreck-Montagetabletten hinzu (G1401 wird empfohlen). Wählen Sie den entsprechenden Fluoreszenzkanal aus, um Bilder zu beobachten und zu sammeln. Die Scheiben können 15 Tage bei 4 ° C in einer lichtdurchsichtigen Slide-Box gelagert werden.

Vorsichtsmaßnahmen

Nachdem das Produkt bei Raumtemperatur geschmolzen ist, verwenden Sie eine Zentrifuge für die kurze Zentrifugation und verwenden Sie nach dem Blasen und Mischen eine saubere Saugspitze.

2. Verglichen mit fluoreszierendem sekundären Antikörper weist das TSA-Kit eine höhere Empfindlichkeit und ein stärkeres Signal auf. Daher muss die Konzentration des primären Antikörpers verringert werden, im Allgemeinen um 5-10-mal auf der Grundlage des in der Antikörperhandbuchs empfohlenen Verdünnungsverhältnissen, um die durch nichtspezifische Bindung verursachte Hintergrundfluoreszenz zu reduzieren. Es wird empfohlen, die Gradientenkonzentration des primären Antikörpers einzustellen, um den besten Effekt zu erhalten.

3. Wenn die Hintergrundfluoreszenz stark ist, wird empfohlen, den Abschreckschritt von Gewebeautoofluoreszenz hinzuzufügen.

Das empfohlene Verdünnungsverhältnis von Fluoreszenztyramid beträgt 1: 500, und das Verdünnungsverhältnis kann entsprechend den experimentellen Ergebnissen eingestellt werden (der empfohlene Verdünnungsverhältnisbereich beträgt 1: 200-1: 1000).

Für mehrere fluoreszierende Kennzeichnungen wird empfohlen, den polyklonalen Antikörper zuerst inkubieren, dann den monoklonalen Antikörper inkubieren; Inkubieren Sie den Antikörper, der dem Target-Target-Protein mit niedrigem Fülle entspricht, zuerst, und inkubieren Sie dann den Antikörper, der dem Target-Protein mit hoher Fülle entspricht.

6. Bitte tragen Sie während des Betriebslabormantels und Einweghandschuhe.

G1222-50LADEL.Reagenz -1 (1)downloadimg.Scheibe 13.Scheibe 12.Scheibe 10

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