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G3409-5000U Rekombinant TEV Protease sein Tag

Spezifikation:5000UL.
Verwendungszweck:MBP, GST, seine oder andere markierte Proteine ​​aus Fusionsproteinen entfernen.
Lagerung und Transport:Transport mit nassem Eis; Laden bei -20, 12 Monate gültig.
u:
Verfügbarkeitsstatus:
  • G3409-5000U.
  • Servicebio

Produktbeschreibung

Überblick

Rekombinante Tev-Protease ist ein Protein, das die Cysteinprotease des Tabakätzvirus (TEV) mit seinem Tag in Escherichia Coli ausdrückt. TEV-Protease ist eine häufig verwendete Cysteinprotease, die die Heptopeptidsequenz glu-asn-leu-tyr-phe-gln-gly / ser (enlyfqg / s) spezifisch erkennen kann, und die Enzym-Verdauung zwischen GLN (Q) und Gly / Ser (G / s) Aminosäurereste. Die optimale Verdauungstemperatur von rekombinantem TEV-Protease beträgt 30 ° C, und die enzymatische Aktivität rekombinanter TEV-Protease ist im Bereich von 29 bis 34 ° C hoch. Wenn jedoch die Temperatur 37 ℃ erreicht oder übersteigt, verringert sich jedoch die enzymatische Aktivität von rekombinantem TEV-Protease stark. In der tatsächlichen Operation, um die Struktur und die biologische Aktivität des Zielproteins so weit wie möglich zu erhalten, wird empfohlen, die TEV-Protease-Enzym-Verdauung über Nacht bei 4 ℃ zu verwenden. Die rekombinante TEV-Protease ist im pH-Bereich von 6,0 bis 9,0 aktiv, verliert jedoch seine Enzymaktivität, wenn der pH-Wert von weniger als oder gleich 5TEV-Protease ist immer noch eine hohe Aktivität in 400mm Imidazol. Daher kann für die Reinigung eines Sollproteins, das sein Etikett durch Nickelsäule enthält, TEV-Protease direkt in die gereinigte Target-Proteinlösung gegeben werden, die eine hohe Konzentration von Imidazol enthält. Bei 4 ℃ wird das Imidazol durch Dialyse entfernt und der Enzym-Verdauung wird gleichzeitig durchgeführt. Es ist auch möglich, sein Etikett durch enzymatische Verdauung mit TEV-Protease nach der Dialyse zu entfernen. Die TEV-Protease mit seinem Tag in der Target-Proteinlösung nach der Enzym-Verdauung und dem herausgerasteten Seinem Tag kann durch Bindung mit Nickelsäule entfernt werden.

Anwendung:Es wird häufig verwendet, um MBP, GST, seine oder andere markierte Proteine ​​aus Fusionsproteinen zu entfernen. Tev Protease hat ein eigenes Etikett und kann an die Nickel-Säule binden.

Quelle:Tabakätzer-Virus (TEV) Cystein-Protease, rekombinante Expression von Escherichia coli, mit seinem Etikett.

Enzymaktivitätsdefinition:Bei 30 ℃, pH8,0, 3 ug Substrat (enthaltend rekombinanter TEV-Protease-Spaltstelle) kann innerhalb von 1 bis 1h mehr als 85% der erforderlichen Enzymaktivitätseinheit gespalten werden.

Inaktivierung oder Inhibierung:Häufige Serin-Protease-Inhibitoren wie PMSF, Aebf, Bestatin, Peppatin und EDTA hemmen nicht die TEV-Proteaseaktivität. Protease-Inhibitoren, die an Cysteinrückstände zielen, wie NEM oder IAA, können die Aktivität von TEV-Protease erheblich hemmen. TEV Protease behält immer noch höhere Enzymaktivitäten in der höheren Konzentration von Imidazol auf.

Reinheit und Konzentration:SDS-PAGE-Testreinheit ≥95%, 10 U / μl.

Rekombinante TEV-Protease-Speicherlösung:50 mm Tris-HCl, 250 mm NaCl, 1 mm EDTA, 5 mm DTT, 50% (v / v) Glycerin, pH 8,0.

10 × TEV-Puffer:500 mm Tris-HCl, 500 mm NaCl, 5 mm EDTA, 10 mm DTT, pH 8,0.


Komponentennummer

Komponente

G3409-5000U.

G3409-1.

Rekombinante TEV-Protease (sein-Tag) (10 U / μl)

500 μl.

G3409-2.

10 × TEV-Puffer

3 × 1 ml

G3409-3.

Kontrollprotein

100 μl.

Produktverwendung.


1.Portenase-Verdauungssystemempfehlung

Komponente

Volumen

10 × TEV-Puffer

5 μl.

Interesse Protein.

30 μg

Rekombinante TEV-Protease (sein-Tag) (10 U / μl)

1 μl.

ddh.2O

Bis 50 μl.

2. Das Reaktionssystem wurde 1-4h bei 30 ° C angeordnet. Wenn das Zielprotein bei 30 ° C nicht stabil ist, kann das Reaktionssystem über Nacht bei 4 ° C zur enzymatischen Verdauung (etwa 16 Stunden) platziert werden.

3. Der SDS-PAGE-Assay wurde an einer 10 μl-Probe des Verdauungsprodukts durchgeführt, um die Digestion-Dosierungs- und Reaktionsbedingungen zu bewerten


Anmerkungen


1. Enzymprodukte sollten in einem Eiskasten oder Eisbad platziert werden und unmittelbar nach dem Gebrauch bei -20 ℃ gespeichert werden. Es wird ein separater Speicher empfohlen.

2. Tragen Sie für Ihre Sicherheit und Gesundheit einen Labormantel und Einweghandschuhe, um zu arbeiten.


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