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IP-Lysepuffer 100ml-Lösung zum Lyse-Zellgewebe zur Herstellung von Proteinproben

Verfügbarkeitsstatus:
  • G2038-100ML.

Produktbeschreibung

Produkteinführung

IP-Lysat ist ein Lysat, das Zellen oder Gewebe lysiert, um Proteinproben unter nicht denaturierenden Bedingungen vorzubereiten. Die durch Lysinggewebe oder Zellen mit dieser Lyserösung erhaltenen Proteinproben mit dieser Lyse-Lösung können in der Seite, dem Western-Blot, der Immunpräzipitation (Immunolfällung, IP), CO-Immunopräzipitation (CO-IP), Chip (Chromatin-Immunopre-List) und ELISA-Experimente verwendet werden.

Die Hauptkomponenten dieses Produkts sind 25 mM Tris-HCl, 150 mm NaCl, 1 mm EDTA, 1% NP-40 und 5% Triton X-100. Es kann auf tierische oder pflanzliche Gewebe- und Zellproben sowie auf Pilz oder Bakterienproben angewendet werden.

Anweisungen

Bringen Sie Ihren eigenen Protease-Inhibitor mit. Protease-Inhibitoren sollten vor der Verwendung zu dem IP-Lysat hinzugefügt werden, und G2006, G2007, G2008 usw. werden empfohlen, den Proteinabbau zu verhindern. Die in den folgenden Nutzungsverfahren erwähnte IP-Lyse-Lösung bedeutet, dass Proteaseinhibitoren zugegeben wurden.

Für Gewebeproben:

1. Die Gewebestücke werden mit vorgekühlten PBS (G4202 empfohlen) gewaschen, um Blutflecken zu entfernen, in kleine Stücke zu schneiden und in einen Homogenisator zu platzieren.

2. Fügen Sie 10-mal-Gewebevolumen-IP-Lyse-Puffer-Niedertemperatur-Homogenat hinzu (empfehlen Sie den Hochgeschwindigkeits-Gewebeschleifer KZ-III-F und KZ-III-FP unabhängig von servicebio). Es sei angemerkt, dass die Menge an IP-Lysat in einem Verhältnis von etwa 50 mg Gewebe auf 1 ml Lysat zugegeben werden kann. Wenn der Gehalt an Gewebeprotein niedrig ist, kann die Menge an Lysat reduziert werden, um die Proteinkonzentration in der rohen Extraktlösung zu erhöhen.

3. Übertragen Sie das Homogenat auf ein 1,5 ml-Zentrifugenröhrchen und schütteln Sie. In dem Eisbad 30 Minuten können Sie alle 10 Minuten wiederholt pipetten, um sicherzustellen, dass die Gewebezellen vollständig lysiert sind;

4. Zentrifugierung bei 12000 g für 5 Minuten und sammeln Sie den Überstand, der die Gesamtproteinlösung ist.

Für haftende Zellproben:

1. Waschen Sie die Zellen 2-3 mal mit PBS, und saugen Sie die verbleibende Flüssigkeit zum letzten Mal gründlich auf.

Gemäß dem Verhältnis von 250 μl Lysat für Zellen in jeder Vertiefung der 6-Well-Platte, pipettieren Sie das IP-Lysat in die Zellkulturplatte und die Flasche, und schütteln Sie die Platte und die Flasche wiederholt, um das Lysat vollständig zu kontaktieren 3-5 min.

3. Kratzen Sie die Zellen mit einem Zellschaber ab und sammeln Sie sie in einem Zentrifugenröhrchen.

4. Zentrifugierung bei 12000 g für 5 Minuten und sammeln Sie den Überstand, der die Gesamtproteinlösung ist.

Für Suspensionszellenproben:

1. Sammeln Sie Zellen durch Zentrifugation.

2. Mischen Sie die Zellflüssigkeit mit dem IP-Lyse-Puffer im Verhältnis von 250 μl Lyse-Puffer pro Vertiefung der 6-Well-Platte und schütteln.

3. In einem Eisbad 30 Minuten, in diesem Zeitpunkt mehrmals alle 10 Minuten Pipette, um sicherzustellen, dass die Zellen vollständig lysiert sind.

4. Zentrifugierung bei 12000 g für 5 Minuten und sammeln Sie den Überstand, der die Gesamtproteinlösung ist.

Für Bakterien- oder Pilzproben:

1. Nehmen Sie 1 ml Bakteriensuspension, Zentrifuge, um den Überstand zu entfernen, einmal mit PBS waschen, um die Flüssigkeit vollständig zu entfernen. Wirbel, um die Bakterien so weit wie möglich zu zerstreuen.

2. Fügen Sie 100-200 μl IP-Lyse-Puffer und Wirbel sanft hinzu, um die Bakterien und den Lyse-Puffer gründlich zu mischen.

3. In einem Eisbad für 10 Minuten, Pipette mehrmals alle 2 Minuten, um eine vollständige Lyse der Bakterien zu gewährleisten.

4. Zentrifugierung bei 12.000 g 5 min und sammeln Sie den Überstand, der die Gesamtproteinlösung ist.


Vorsichtsmaßnahmen

1. Gewebe oder Zellen können beim Lysiert klebrig erscheinen. Es kann wiederholt oder verworfen werden, bis es flüssig ist. Wenn es dicker war, können Sie eine geeignete Menge an Lyse-Lösung hinzufügen.

2. Dieses Reagenz enthält keine Protease-Inhibitoren, Sie müssen Ihre eigenen Protease-Inhibitoren vorbereiten und sie vor der Verwendung hinzufügen. Es wird empfohlen, unseren Unternehmen G2006, G2007, G2008 und andere verwandte Protease-Inhibitoren zu verwenden.

3. Die gesamte Proteinlösung, die durch Lyse dieses Produkts erhalten wird, ist mit dem BCA-Protein-quantitativen Erkennung des BCA-Proteins (G2026) kompatibel.

4. Bitte tragen Sie während des Betriebslabors und Einweghandschuhe.


G2038-100ML.

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