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Immunhistochemistry Kit Anti-Maus-Sekundärantikörper Zweistufige Immunhistochemie-Kit

Verfügbarkeitsstatus:
  • G1216-200T.
  • ServiceBio.

Produktbeschreibung

Produkteinführung


Dieses Kit ist ein Zwei-Sensitivität-Zweistufer-Immunhistochemie-Kit, das zur späteren Farbentwicklung von Antikörpern geeignet ist, deren primäre Antikörper von Mäusen abgeleitet sind. Das Kit enthält Meerrettichperoxidase HRP-konjugiert Ziege Anti-Mouse-IgG. Dieses Produkt eignet sich für maus-abgeleitete Primärantikörper. In IHC- und Western-Blot-Experimenten werden die HRP-markierte Ziege-Anti-Maus-Sekundärantikörper mit dem mit dem Maus abgeleiteten Primärantikörper kombiniert (reagiert mit dem Antigen zuerst reagiert) kombiniert und reagiert dann mit DAB. DAB ist ein Substrat von Meerrettichperoxidase (HRP). Unter der Katalyse von HRP erzeugt DAB braune Ausfällungen, um eine Signalverstärkung und Farbentwicklung zu erreichen.


Lagerung und Transport


Transport in nassem Eis; Bewahren Sie den sekundären Antikörper bei -20 ° C auf und speichern Sie die DAB-Verdünnung und 50 × DAB-Stammlösung bei 4 ° C; Die Gültigkeitsdauer beträgt 12 Monate.


Bereit zu arbeiten


1. Bringen Sie Ihre eigene PBS (empfohlen G4202, G022), Kernerminister-Reagenzien (empfohlene Hämatoxylin-Färbungslösung G1004, Hämatoxylin-Differenzierungslösung G1039, Hämatoxylin, die blaue Lösung G1040), Gradientalkohol, Xylol, Montagetabletten usw. zurückkehren.


2. Bereiten Sie die Arbeitslösung des sekundären Antikörpers vor: Verdünnen Sie den sekundären Antikörper der HRP-markierten Ziege-Anti-Maus mit PBST (pH 7,2-7.4) in einem Verhältnis von 1: 200, um die Arbeitslösung des sekundären Antikörpers zu erhalten. Zur sofortigen Verwendung vorbereitet, verwenden Sie innerhalb von 48 Stunden.


3. Bereiten Sie die Farbentwicklung der DAB-Farbentwicklung vor: Fügen Sie 20 μl 50 × DAB-Aktienlösung zu jedem 1 ml DAB-Verdünnungsmittel hinzu, mischen Sie die Gute für den späteren Gebrauch gut. Auf Anfrage vorbereitet, jetzt einsatzbereit.




Schritte


Nach den routinemäßigen immunohistochemischen Verfahren sind die Gewebeabschnitte vor dem Deparaffiniert, antigen Abrufen, blockiert und mit dem primären Antikörper inkubiert und dann dreimal mit PBS für jeweils 5 Minuten gewaschen.


2. Sekundärantikörper-Inkubation: Fügen Sie 50-100 μl der sekundären Antikörper-Arbeitslösung zu jeder Scheibe hinzu, um das Gewebe vollständig abzudecken, und inkubieren Sie 30-60 Minuten bei Raumtemperatur. Dreimal mit PBS jeweils 5 Minuten waschen.


3. DAB-Farbentwicklung: Fügen Sie eine 50-100 μl-DAB-Arbeitslösung tropfenweise zu jeder Scheibe, inkubieren Sie mehrere Minuten bei Raumtemperatur, beobachten Sie unter einem Mikroskop, um die Farbentwicklung auf den erwarteten Effekt zu steuern und dann sofort mit Wasser zu waschen, um das zu stoppen Farbentwicklung.


4. (optional) Erfüllende Zellkerne: Die Abschnitte werden mit Hämatoxylin-Färbungslösung für 3-5 min befleckt und dann mit Leitungswasser gewaschen; nach rascher Differenzierung mit Hämatoxylin-Differenzierungslösung für 3-5 s für 3-5 s, dann mit Leitungswasser gewaschen; Mit Leitungswasser gewaschen oder mit Hämatoxylinlösung 3-5 s in Blau zurückgebracht.


5. Montage: Die Scheiben sind durch Gradientalkohol gemäß den üblichen Schritten dehydratisiert, Xylol ist transparent, und die Folien sind mit neutralem Kaugummi montiert.




Vorsichtsmaßnahmen


1. Wenn der Hintergrund während der immunhistochemischen Farbentwicklung zu dunkel ist, sollten Sie die Waschzeit erwägen, eine geeignete Blockierlösung zum Blockieren, inaktivieren endogener Katalase, verkürzen Sie die Farbentwicklungszeit und verringern Sie die Konzentration des sekundären Antikörpers. Wenn keine Farbentwicklung oder die Farbentwicklung zu licht ist, können Sie die Konzentration des primären Antikörpers und den sekundären Antikörper angemessen erhöhen, um die Farbentwicklungszeit zu erweitern, und prüfen Sie dann, ob der sekundäre Antikörper normalerweise entwickelt ist.


2. DAB ist schädlich für den menschlichen Körper, bitte seien Sie vorsichtig, wenn Sie damit umgehen, und achten Sie darauf, direkten Kontakt mit dem menschlichen Körper oder Inhalation des Körpers zu vermeiden.

G1216-200T.

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