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Produktkategorie

Anteil an:

RNA-Extraktions-flüssiges molekulares Biologie Reagens

Verfügbarkeitsstatus:
  • G3013-100ML.

Produktbeschreibung

Produkteinführung:

Diese Produkt-RNA-Extraktionslösung ist ein Reagens, das zur totalen RNA-Extraktion aus Zellen oder Geweben verwendet wird. Es verwendet Guanidin-Isothiocyanat und andere Substanzen, um die Zellen schnell zu lysen, um RNA freizusetzen und in Phenol zu extrahieren. Gleichzeitig enthält es RNASE-Inhibitoren, um RNA-Abbau zu verhindern und die RNA-Integrität aufrechtzuerhalten.

Packungsinhalt:

Katze. Nein.

Produktbeschreibung

Volumen

G3013.

RNA-Extraktionslösung.

100ml

Speicherbedingung:

Nasser Eisbeuteltransport; Auf 4 ℃ Temperatur gelagert, gültig für 12 Monate.

Verwendungszweck:

Selbstbereitete LF, Isopropylalkohol, Depc-Wasser, 75% Ethanol (Depc-Wasservorbereitung).

1. Lyse einer Zell- oder Gewebeprobe

Haftende Zellen: Zellkulturmedium entfernen, saubere Zellen mit angemessener Menge vorgekühlter PBS und löschen Sie die PBS so weit wie möglich aus. RNA-Extrakt in die Well-Platte gemäß der Menge von 1 ml RNA-Extrakt pro 6-Well-Platte und 0,5-ml-RNA-Extrakt pro 12-Well-Platte hinzufügen, sanft schütteln, um die Zellen am Boden der Platte vollständig zu berühren, um den RNA-Extrakt vollständig zu kontaktieren, Blasen Sie die Zellen mit Pipettenpistole, um die Zellen lyse zu machen, und transportieren Sie dann in die Zentrifugenröhre und lassen Sie 5 Minuten bei Raumtemperatur stehen.

Suspendszellen: Die Zellen wurden durch Zentrifugation gesammelt, und der Überstand wurde so weit wie möglich entfernt. 1 ml-RNA-Extrakt wurde zu allen 1-10x106-Zellen gegeben, und die Zellen wurden mehrmals mit Pipettenpistole zur Spaltung geblasen, dann wurden die Zellen bei Raumtemperatur 5min gelassen.

Gewebeprobe: Schneiden Sie das Gewebe in kleine Stücke und setzen Sie sie in einen vorgekühlten Homogenisator. Fügen Sie 1 ml-RNA-Extrakt für jedes 100 mg Gewebe hinzu und homogenisieren, bis keine Gewebestücke sichtbar sind. Die Gewebefragmente wurden durch Zentrifugation bei 12000 g bei 4 ° C für 10 Minuten getrennt, und der Überstand wurde in ein neues Zentrifugenröhrchen überführt.

2. RNA-Extraktion: 380UL LF wurde zu jedem 1 ml-RNA-Extrakt gegeben, und dann wurde das Zentrifugenröhrchen gewalttätig für 15 Sekunden durch Wirbelmischungen oder auf den Kopf geschüttelt und für 3 Minuten bei Raumtemperatur gelassen.

3. Zentrifugation: Zentrifugierung bei 12000 g bei 4 ℃ 15 min, übertragen Sie sorgfältig die obere farblose wässrige Phase in das neue Zentrifugenröhrchen und nehmen 500 bis 550UL pro ml Extrakt ab.

4. Fällige RNA: 550ul Isopropanol wurde zu dem oben gesammelten wässrigen Phasen-Extraktrohr zugegeben, mehrmals auf den Kopf gesetzt und bei -20 ℃ für 15 Minuten ausgefällt.

5. Zentrifugation: Zentrifugiert bei 4 ℃ für 10 Minuten bei 12000g, der weiße Niederschläge war an der Unterseite des Röhrchens sichtbar, was insgesamt RNA war, und der Überstand wurde verworfen.

6. Waschen: Fügen Sie 1 ml 75% Ethanol hinzu und mischen Sie es auf den Kopf. Nach Zentrifugation bei 12000 g für 5 Minuten bei 4 ° C wurde der Überstand verworfen und dann kurz mit hoher Geschwindigkeit (5000 g für 3-5s) zentrifugiert. Die Flüssigkeit wurde sorgfältig mit einem Micro-Saugkopf gesaugt.

7. RNA-Auflösung: Das Zentrifugenröhrchen mit RNA-Niederschlag wurde für 3-5 Minuten offen gelassen. Nachdem die RNA leicht getrocknet war, wurde 20 RUL-Depc-Wasser zugegeben, um die RNA vollständig aufgelöst zu machen, was für Konzentrationserfassungen und Folgeexperimente verwendet werden könnte. Achten Sie darauf, die RNA nicht zu viel trocknen, da sonst schwierig ist, sich aufzulösen und das Verhältnis von A260 / 280 auszuwirken.

Anmerkungen:

1. Alle Pipettenspitzen und Zentrifugenröhrchen sind frei von RNase-Kontamination. Sie können sterile enzymfreie Verbrauchsmaterialien von unserem Unternehmen erwerben.

2. Dieses Reagenz enthält Guanidin-Isothiocyanat und ruhbares Phenol. Vermeiden Sie den Kontakt mit der Haut oder Inhalation.

3. Bitte tragen Sie Labor-Kleidung und Einweghandschuhe.

G3013-100MLA.Scheibe 13.downloadimg.Scheibe 11.Scheibe 12.Scheibe 10

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