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Swescript RT II erstes Strang-CDNA-Synthesekit (mit GDNA-Entferner)

Verfügbarkeitsstatus:
  • G3333-50.

Produktbeschreibung

Produkteinführung:

Dieses Produkt verwendet die modifizierte mutierte Reverse-Transkriptase, um den ersten Radstrang von cDNA mit totaler RNA oder mRNA als Vorlage für eine effiziente Reverse-Transkription zu synthetisieren. Das Kit enthält alle Reagenzien, die erforderlich sind, um den ersten CDNA-Strang von cDNA mit hoher Qualität zu synthetisieren, und bietet zwei Arten von cDNA-Syntheseprimern für die Wahl: Die zufällige Hexamer-Primer und Oligo (DT) 18-Primer synthetisierte einsträngige cDNA-Produkte, die direkt sein können Wird für nachfolgende PCR- oder QPR-Reaktionen verwendet. Swescript RT II (Reverse-Transkriptase) ist eine mutierte Reverse-Transkriptase, die auf M-MLV-Reverse-Transkriptase basiert und durch In-vitro-Evolution-Screening erhalten wird. Swescript RT II hat keine RNase H-Aktivität. Der RNA-Abbau in der Vorlage der DNA / RNA-Hybridisierung während der ersten Strang-cDNA-Synthesereaktion wurde vermieden, um den Betrag und die Länge der ersten Strang-cDNA-Synthese sicherzustellen. Verglichen mit dem Wildtyp-Enzym und der ersten Generation von Swescript RT I hat die zweite Erzeugung von Swescript RT II die thermische Stabilität und der cDNA-Syntheseeffizienz weiter verbessert. Es kann cDNA im Bereich von 42 bis 65 ° C effizient synthetisieren und die umgekehrte Transkriptionsreaktion abschließen, sobald 5 min, besonders für die umgekehrte Transkription von RNA mit komplexer Struktur geeignet.

Das Kit liefert auch ein GDNA-Remover-Reagens, das schnell eine restliche genomische DNA-Verunreinigung von RNA-Vorlagen entfernen kann, bevor RNNA-Templates-Schritte die Zuverlässigkeit der experimentellen Ergebnisse verbessern und das Design von QPRCR-Primern, ohne dass ein Cross-Exon-Primer-Konstruktion erforderlich ist.

Packungsinhalt:

Katze. Nein.

Produktbeschreibung

Volumen

G3333.

Swescript RT II erstes Strang-CDNA-Synthesekit (mit GDNA-Entferner)

50RXNS / 100RXNS.

Komponenten:

Komponentennummer

Komponente

G3333-50.

G3333-100.

G3333-1.

Swescript RT II-Enzym-Mixa

50UL.

100UL.

G3333-2.

5x Reaktionspuffer.b

200UL.

400UL.

G3333-3.

Oligo (dt) 18 Primer (100um)

50UL.

100UL.

G3333-4.

Random Hexamer Primer (100Um)

50UL.

100UL.

G3333-5.

GDNA-Entferner

50UL.

100UL.

G3333-6.

10x GDNA Remover-Puffer

50UL.

100UL.

G3333-7.

Nuklease-freies Wasser

1ml

1ml

Handbuch

1 stück

1 stück

a: Mit RNase-Inhibitor

b: Mit dnTP-Mischung & mg² +

Speicherbedingung:

Nasser Eisbeuteltransport; Bei -20 ℃ Temperatur gelagert, gültig für 12 Monate.

Verwendungszweck:

1. Entfernung Genom.

(1) Die RNA-Template und das Nuclease-freie Wasser wurden auf Eis gelegt, um sich für die spätere Verwendung zu schmelzen;

(2) Genomentfernungsreaktion (empfohlenes 10UL-Reaktionssystem):

Komponente

Volumen

10x GDNA Remover-Puffer

1ul

GDNA-Entferner

1ul.

Total RNA / MRNA

0,1 ng-5ug / 10 pg-0.5ug

Nuklease-freies Wasser

Erhöhen Sie bis zum 10UL.

(3) sanft mischen und zentrifugieren;

(4) Inkubieren Sie bei 37 2 min inkubieren und dann zum späteren Gebrauch auf Eis legen;

2. Synthese der ersten Strang-cDNA

(1) Herstellung des Reverse-Transkriptionsreaktionssystems (20UL-Reaktionssystem wird empfohlen);

Komponente

Volumen

Im vorherigen Schritt entfernte das Genom die Reaktionsflüssigkeit

10ul

5x Reaktionspuffer.

45.

Oligo (dt) 18 Primer (100um)

1ul.

oder zufälliger Hexamer-Primer (100Um)

oder 1UL.

oder Genspezifische Primer (2UM)

oder 1UL.

Swescript RT II-Enzym-Mix

1ul.

Nuklease-freies Wasser

Auf 20ULL

HINWEIS: Bei hohen GC oder komplexen Vorlagen kann die RNA-Vorlage, die REVER-Transkription-Primer und das Neigsase-freies Wasser im Voraus gemischt und anschließend schnell auf Eis abgekühlt werden, nachdem er 5 min bei 65 ° C aufbewahrt wurde. Und dann fügen Sie die anderen Komponenten hinzu.

(2) sanft mischen und zentrifugieren;

(3) Umkehren von Transkriptionsprogramm Rahmen:

Temperatur

Time

25 ℃ A.

5 Minuten

55 ℃ B.

5-15 min

85 ℃.

5 S.

A: Zum Beispiel wird der zufällige Hexamer-Primer ausgewählt und 5 min bei 25 ° C inkubiert, dann wird die anschließende Reaktion ausgeführt. Wenn Sie die Verwendung von Oligo (DT) 18 Primer oder Gene-spezifische Primer entscheiden, können Sie direkt bei 55 ℃ reagieren.

B: Bei hohen GC- oder Komplexvorlagen kann die umgekehrte Transkriptionstemperatur auf 65 ° C erhöht werden.

Anmerkungen:

1. Bitte tragen Sie während des Betriebs Einweghandschuhe, um die Kontamination von RNase zu vermeiden.

2. Die Reverse-Transkriptionsprodukte können für kurze Zeit bei -20 ° C gespeichert werden. Wenn der langfristige Speicher erforderlich ist, wird empfohlen, sie bei -80 ° C nach der Verpackung zu speichern, um wiederholte Freeze-Tau-Zyklen zu vermeiden.

3. Wenn die Vorlage aus eukaryotischem Ursprung ist, wird empfohlen, Oligo (DT) 18-Primer auszuwählen, und pailisieren Sie ihn mit dem 3 'Poly A-Schwanz aus eukaryotischer mRNA, um die höchste Ausbeute an cDNA in voller Länge zu erhalten.

4. Bei der umgekehrten Transkription von prokaryotischer RNA sollte ein zufälliger Hexamer-Primer oder der Genspezifische Primer verwendet werden.

Der zufällige Hexamer-Primer hat eine große Anwendbarkeit und eignet sich für mRNA, RRNA, TRNA, kleine RNA- und LNCRNA-Vorlagen.

6. Wenn die Reverse-Transkription von QPCR-Assay folgt, kann Oligo (DT) 18-Primer und zufälliger Hexamer-Primer gemischt werden, um in allen Bereichen von mRNA gleich zu erstellen, was dazu beiträgt, die Echtheit und Wiederholbarkeit von quantitativen Ergebnissen zu verbessern.

7. Wenn die nachfolgenden QPCR-Primer über Exons ausgelegt sind, kann der Entoomentfernungsschritt weggelassen werden.

G3333-50A.downloadimg.Scheibe 11.Scheibe 12.Scheibe 13.Scheibe 10


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